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2024-12-26
化妆品功效评价中动物实验是传统评价方法之一，但是一方面由于人与动物之间的生理特征存在一定差异，动物实验无法准确反映人体皮肤在使用化妆品后的真实反应；另一方面，目前许多国家出台了禁止和限制动物实验的法规，严禁销售经过动物实验的化妆品。而皮肤细胞模型大多来自于人体细胞培养，避免了种间差异带来的影响，并且具有试验周期较短、操作便捷等优点，可广泛应用于化妆品功效评价的体外替代实验中。
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黑素细胞（Melanocyte，MC）和B-16细胞
MC是皮肤内的一种特殊细胞，它位于表皮的基底层，细胞内的黑素小体（Melanosomes）能合成黑色素（Melanin），并转移到周围的角质形成细胞中，为皮肤提供颜色。黑色素合成是体内酪氨酸酶催化下进行的酪氨酸羟化反应过程，酪氨酸酶为黑色素生成反应的限速酶，其活性和数量决定着黑色素生成的产量和速度。皮肤中黑色素的数量会直接影响皮肤的颜色，MC的数量越多黑色素的含量越多，MC中酪氨酸酶活性越高也可促进MC合成黑色素的量增加。
对比KC这一种高度增殖的细胞类型，MC的增殖则较为缓慢。因此，实验中通常采用小鼠B-16黑色素瘤细胞（简称B-16细胞）或人G361黑色素瘤细胞替代MC作为实验对象，进行美白化妆品功效评价。其中B-16细胞在基本结构与黑色素合成功能方面与人MC基本相同，且增殖能力更强，能够多次传代，适合用于实验研究，因此应用更为广泛。
化妆品原料的美白功效评价通常从B-16细胞生长情况、黑色素合成量及对酪氨酸酶的抑制作用几方面进行。
巨噬细胞：抗敏化妆品功效评价
巨噬细胞是一种源自单核细胞的免疫细胞，在人体内参与非特异性防卫（先天性免疫）和特异性防卫（细胞免疫），主要功能是以固定细胞或游离细胞的形式对细胞残片及病原体进行噬菌作用（即吞噬以及消化），并激活淋巴球或其他免疫细胞，令其对病原体作出反应。当单核细胞经血管的内皮细胞层进入已受损的组织时（这过程被称为白血球外渗作用），它经过一连串转变成为巨噬细胞（单核-巨细胞）。在特异性免疫应答中，巨噬细胞可分泌释放多种细胞因子（如：IL-1和IL-12等）参与免疫调节。THP-1是一种人类白血病单核细胞系，朗格汉斯细胞作为皮肤中的一种树突状细胞，是表皮中唯一的抗原呈递细胞，在皮肤免疫中发挥着重要作用。但是其在表皮中含量较少，增殖能力较弱，因此实验中也经常使用THP-1细胞建立化合物在细胞活化和静止条件下的免疫调节作用的模型，替代朗格汉斯细胞，用于抗敏化妆品功效评价中。
通过检测THP-1细胞中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白细胞介素（ILs）的释放可评价化妆品原料的抗敏功效。TNF-α和ILs是单核细胞向巨噬细胞极化时细胞识别抗原并分泌的促炎症细胞因子。
THP-1细胞释放的TNF-α和IL-6在一个称为Th1反应的过程中遇到并激活抗原特异性杀伤T细胞。相反，在过敏原暴露的反应中，巨噬细胞交替分泌Th2细胞因子如IL-4，并激活Th2介导的过敏反应。
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